第一章常规PCR技术第一章常规PCR技术第一节基于DNA的常规PCR技术一、 引言聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR），是20世纪后期发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术，具有快速、简便和灵敏度高的优点。通过PCR，可以使微量的核酸（DNA或RNA）得以脱离于活体生物并进行大量复制，用于研究和检测鉴定。
人类对于核酸的研究已经有百余年的历史。20世纪60年代末70年代初，人们开始致力于研究基因的体外分离技术，但是由于核酸的含量较少，在一定程度上限制了DNA的体外操作。Khorana等于1971年最早提出在体外使DNA变性，并与适当引物杂交，然后用DNA聚合酶延伸，从而达到克隆DNA的设想。但是，当时的基因序列分析方法尚未成熟，对热具有较强稳定性的DNA聚合酶还未被发现，寡核苷酸引物的合成仍处在手工、半自动合成阶段，这种想法似乎没有任何实际意义。
1985年，美国科学家Kary Mullis在高速公路的启发下，经过两年的努力，发明了PCR技术，并在Science杂志上发表了关于PCR技术的第一篇学术论文Saiki R K,Scharf S，Faloona F,Mullis K B,Horn G T,Erlich H A,Arnheim N.Enzymatic amplification of β?globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia.Science,2304732:1350?1354.。从此，PCR技术得到了生命科学界的普遍认同，Kary Mullis也因此获得1993年的诺贝尔化学奖。但是，最初的PCR技术相当不成熟，在当时是一种操作复杂、成本高昂、“中看不中用”的实验室技术。1988年年初，Keohanog通过对所使用酶的改进，提高了扩增的真实性。而后，Saiki等又从生活在美国黄石公园温泉中的水生嗜热杆菌内提取到一种耐热的DNA聚合酶，使得PCR技术的扩增效率大大提高。也正是此酶的发现使得PCR技术得到了广泛的应用，使该技术成为遗传与分子生物学分析的基石。在以后的几十年里，PCR方法被不断改进：它从一种定性的分析方法发展到定量测定；从原先只能扩增几kbp的基因到目前已
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