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| 編輯推薦： |
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本书内容源自作者多年植物病原微生物电镜研究成果，内容原创度高，收录珍贵的病原微生物电镜照片410多幅，对于从事微生物学及电镜技术相关研究的人员具有较大的参考价值。
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| 內容簡介： |
本书是一部囊括电镜方法学、病原物形态结构、细胞病理学三位一体的研究技术专著，内容源自作者35年的研究工作成果。共分两部分。*部分为病原微生物的电镜观察，包括植物病毒、昆虫病毒、真菌病毒及类菌原体、类细菌体等，详细分析了感病细胞的结构及各种胞器的病理变化，病原物在细胞内的分布形式与侵染区域位置的定位等。第二部分阐述电镜制样技术的关键因素分析及策略，结合电镜方法学进行详细的描述和解读，包括负染技术、超薄切片技术、免疫电镜技术、放射自显影技术等。
本书收录珍贵的植物病原微生物电镜照片410多幅，文中提出了很多新的学术观点，如病毒及内含体与细胞膜系统（胞质膜、液泡膜、内质网膜、核膜、线粒体膜等）在侵染与复制中相互间的关联性，在菜豆畸矮病毒中发现世界*小的单链DNA病毒（直径9~11毫nm）等。
本书内容原创度高，可供生物学、植物病理等领域的研究人员阅读参考。
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| 關於作者： |
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徐绍华，中国科学院微生物研究所高级工程师。在电?R技术与病毒学的研究实践中，突破了单纯技术观点，实现了研究与技术的结合，完善了电镜制样技术的系统理论总结，为电镜技术在国内的迅速发展做了大量普及工作。曾先后应中国植物病理学会、北京植物病理学会、新疆微生物学会、中国农业大学微生物系、农业部全国高等农业院校教师培训班等单位的邀请，进行学术交流和技术讲课。
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| 目錄：
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第一章 土传小麦花叶病毒的电镜研究 001
一、概论 002
二、电镜观察 002
1.负染的病毒粒子（杆状） 003
2.单体细胞的放大 003
3.胞质内的病毒 003
4.病毒的纵横切面 003
5.放大的病毒横切 003
6.健株的叶绿体 004
7.病株的叶绿体 004
8.淀粉粒淤积 005
9.叶绿体多种病变形态 005
10.叶绿体片层解体 005
11.病健细胞核对比 005
12.细胞核畸变 006
13.结晶状内含体 007
14.不定形体与髓鞘样结构 007
第二章 唐菖蒲花叶病毒（北京分离株）的电镜观察 023
一、概论 024
二、电镜观察 025
15.负染的病毒粒子（特长杆状） 025
16.表皮细胞的不同变化 025
17.表皮细胞的局部放大 025
18.筛管细胞中的核损伤 025
19.胞质区的病毒分布 026
20.病毒与质膜、液泡膜的相关性 026
21.细胞核严重病变 026
22.细胞核解体，次生液泡增生 027
23.线粒体增殖、空泡化 027
24.结晶状内含体 027
第三章 唐菖蒲花叶病毒（深圳分离株）的电镜观察 039
一、概论 040
二、电镜观察 040
25.负染的病毒粒子（线状） 040
26.内含体侵蚀核膜 040
27.多个细胞内的病毒及内含体 041
28.病毒内含体与线粒体 042
29.线粒体内外膜崩解 042
30.叶绿体、线粒体畸变 042
31.线粒体增生 043
32.线粒体、叶绿体严重损伤 044
33.细胞核崩解 044
34.病毒内含体侵入细胞核 045
35.细胞核畸形，核膜瓦解 045
36.病毒在胞质区的分布 045
37.结晶状内含体 045
第四章 唐菖蒲花叶病毒（沈阳分离株）的电镜观察 060
一、概论 061
二、电镜观察 061
38.负染的病毒粒子（线状） 061
39.多个细胞内的病毒及内含体 061
40.病毒、内含体与线粒体解体 061
41.病毒、内含体与叶绿体崩解 062
42.线粒体、叶绿体解体与不定形体、环状物 062
43.多个细胞中线粒体受损 063
三、小结 063
第五章 大豆花叶病毒超微结构的研究 070
一、概论 071
二、电镜观察 071
44.负染的病毒粒子（线状） 071
45.完整的风轮内含体 071
46.管状、卷轴状内含体 072
47.带状、束状内含体与病毒粒子 073
48.内含体在胞质内的分布 073
49.细胞核、叶绿体严重病变 073
50.风轮内含体侵入细胞核 074
51.细胞核内的不定形体、与液泡膜相融 074
52.线粒体畸变、大量增生 075
53.环状内含体、髓鞘样结构 075
第六章 四季参卷叶病毒的电镜观察 086
一、概论 087
二、电镜观察 087
54.完整的风轮内含体 087
55.病毒在细胞内的分布 088
56.核膜上见风轮内含体 088
57.细胞核畸变 089
58.叶绿体畸变 089
59.畸形的叶绿体、球状体外溢 090
60.淀粉粒淤积，病毒侵染胞壁 090
61.叶绿体横切面及多泡体结构 091
第七章 玉米矮花叶病毒的电镜观察 100
一、概论 101
二、电镜观察 101
62.特殊形态的风轮状内含体 101
63.内含体在细胞内的分布形式 102
64.线粒体、叶绿体严重畸变 102
65.叶绿体崩解散落过程 103
66.细胞核的病变 103
第八章 木瓜环斑病毒的电镜观察 110
一、概论 111
二、电镜观察 111
67.负染的病毒粒子 111
68.筛管细胞中的风轮状内含体 112
69.胞质内的风轮、卷轴、环状内含体 112
70.质膜、液泡膜附近的病毒内含体 112
71.线粒体崩解与囊泡结构 113
72.细胞核、线粒体周边的风轮状、环状内含体 113
73.细胞壁、胞间联丝结构畸变 114
74.叶绿体片层结构解体，胞壁崩解 114
75.叶绿体片层结构异变及多层环状结构 114
76.细胞结构破损及大量囊泡、环状物 115
77.细胞核的严重病变 115
78.畸形的细胞核呈分枝状 115
79.多层环的髓鞘样结构 115
第九章 蚕豆萎蔫病毒的电镜观察 130
一、概论 131
二、电镜观察 131
80.负染的病毒粒子（球状） 131
81.病毒结晶聚集体 132
82.褪绿斑症状区病毒聚集体 132
83.病毒聚集体形成的不同阶段 132
84.褪绿斑症状区的板式结晶体 132
85.病毒聚集体的形成过程 132
86.褪绿斑症状区结晶状内含体 132
87.细胞核内的病毒聚集体 133
88.病毒聚集体侵入细胞核，线粒体增生 133
89.核仁区见病毒粒子 133
90.病毒多种形式分布于胞质区及囊池、管状结构 134
91.病毒聚集线粒体周围 134
92.线粒体与多层环状内含体的相关性 135
93.细胞中的高尔基体 135
第十章 花椰菜花叶病毒的电镜观察 151
一、概论 152
二、电镜观察 152
94.负染的病毒粒子（球状） 152
95.病毒以包含体形式存在于细胞中 152
96.包含体病毒与多泡体结构 152
97.包含体在细胞内的分布与胞间联丝的相关性 153
98.细胞中的膜状体结构 153
99.质膜系统受损，胞间联丝畸变 154
100.多泡体与质膜系统的相关性 154
101.髓鞘样结构的两种形态 155
102.髓鞘样结构与胞质膜、液泡膜的相关性 155
第十一章 菜豆畸矮病毒的电镜观察 166
一、概论 167
二、电镜观察 167
103.负染的病毒粒子（球状） 167
104.细胞核内的病毒粒子 167
105.完整的表皮细胞中病毒的分布，结构的变异 168
106.细胞核内大量的病毒颗粒及不定形体 168
107.细胞核、线粒体周边密集大量病毒 168
108.核膜孔破裂，内质网增生、畸变 168
109.细胞核膜、线粒体内外膜密集大量病毒 168
110.病毒与组织内膜结构紧密相连 169
111.病毒在胞质区内不同的分布形式 169
112.呈长轨式排列的病毒 170
113.放大的病毒在细胞内的存在形式 170
114.病毒以叠加的形式形成结晶团块 170
115.病毒密集于线粒体、液泡膜周边，见髓鞘样结构 170
116.液泡膜上密集病毒与结晶聚集体 170
第十二章 白粉虱体内菜豆畸矮病毒的电镜观察 185
一、概论 186
二、电镜观察 186
117.白粉虱唾腺体细胞结构 186
118.细胞结构的局部放大 186
119.弥散分布于胞质中的病毒 186
120.弯曲的管状结构上排列着病毒 187
第十三章 香蕉花叶病的电镜观察 192
一、概论 193
二、电镜观察 193
121.负染色与组织切片中的病毒粒子（杆状） 193
122.免疫电镜技术下的病毒形态特征 194
123.感病细胞结构的病理变化 194
124.细胞核的畸变 194
125.细胞中呈三角形的结晶状内含体 195
126.线粒体大量增生与六角形结晶状内含体 195
127.输导组织中的质膜体结构 195
第十四章 香蕉束顶病的电镜观察 204
一、概论 205
二、电镜观察 205
128.香蕉叶脉输导组织中的BLO 205
129.茎段输导组织中的BLO 206
130.分裂式繁殖的BLO 206
131.类细菌体典型的细胞壁结构 206
132.BLO的不同形态 207
133.BLO二分裂式的繁殖方式 207
134.负染色的BLO颗粒 207
第十五章 交脉蚜体内类细菌体的电镜观察 216
一、概论 217
二、电镜观察 217
135.唾腺体内脂肪滴及不定形体 217
136.口器中的BLO颗粒 217
137.口器中多形态的BLO 217
138.BLO颗粒的纵横切面 217
第十六章 海带叶卷病的电镜观察 222
一、概论 223
二、电镜观察 223
139.海带叶部细胞全图 223
140.海带叶脉组织中多形态类菌原体 225
141.MLO袋状式的聚集，从胞间联丝中通过 225
142.二分裂式的繁殖过程 226
第十七章 枣疯病的电镜观察 231
一、概论 232
二、电镜观察 232
143.韧皮部细胞MLO的分布情况 232
144.根部输导组织中的MLO颗粒 232
第十八章 聚合草矮缩病的电镜观察 236
一、概论 237
二、电镜观察 237
145.筛管细胞中多形态的MLO颗粒 237
146.茎段表皮细胞中的螺旋丝状体及分裂式繁殖过程 237
147.MLO颗粒从胞间联丝中通过 237
148.细胞核的特异变化 238
第十九章 黄地老虎颗粒体病毒的超微结构 244
一、概论 245
二、电镜观察 245
149.脂肪体内颗粒体病毒的分布 245
150.病毒的形态结构组成 245
151.颗粒体病毒双粒子核髓的排列方式 246
152.病毒在昆虫体内装配的全过程由病毒基质聚集开始 246
153.逐步形成病毒核髓 246
154.形成完整的病毒粒子，开始套装蛋白外壳 246
155.颗粒体病毒装配的全过程分解图示 247
第二十章 大菜粉蝶颗粒体病毒的超微结构 255
一、概论 256
二、电镜观察 256
156.颗粒体病毒体内装配的初始阶段 256
157.形成病毒粒子 257
158.套装蛋白外壳最后形成完整的病毒 257
159.病毒的形态特征 257
160.双粒子的包含体结构 257
161.颗粒体病毒纵、横切面的标准图像 257
第二十一章 感染病毒的小麦全蚀菌超微结构 265
一、概论 266
二、电镜观察 267
162.培养7天的小麦全蚀菌形态结构 267
163.培养20天的菌体结构 267
164.小麦全蚀菌形态结构特征 267
165.菌体细胞核、核膜区出现破损 267
166.菌体的细胞壁结构特征 267
167.菌体的垂直横切面，见三层胞壁结构 268
168.个别菌体的胞壁12区段由两层组成 268
169.病毒弥散分布于菌体线粒体与液泡内 268
170.病毒在液泡内呈串球式排列 268
171.病毒与液泡膜的密切相关性 268
172.菌体细胞隔板形成的初始阶段 268
173.隔板形成的中期阶段 269
174.隔板已完全形成，见沃罗宁体 269
第二十二章 用电镜放射自显影术研究TMV-RNA在烟叶细胞中的复制 283
一、概论 284
二、电镜观察 284
175.健康烟叶，细胞核，未见3H标记的沉淀物 284
176.健康烟叶，叶绿体，未见3H标记的沉淀物 285
177.健康烟叶，线粒体，未见3H标记的沉淀物 285
178.接种病毒6天后的感病细胞核见大量3H标记的沉淀物 285
179.病叶细胞核与叶绿体均见3H标记的沉淀物 285
180.病叶细胞中线粒体内未见3H标记的沉淀物 285
181.病毒颗粒密集区见少量3H标记的沉淀物 286
182.病毒颗粒的纵横切面可见极少量3H标记的沉淀物 286
183.接种病毒48h后细胞核内同接种6天后的情况一样 286
184～185.接种48h后经DNA酶处理，细胞核内仍见银粒沉淀 286
186～189.经链霉蛋白酶E和RNA酶处理后细胞核、叶绿体、病毒聚集区内银粒沉淀消失 286
第二十三章 电镜制样技术中的关键因素 303
一、概论 304
1.电镜技术的应用价值及重要性 304
2.电镜技术在植物病毒研究中的重要性 305
3.电镜技术的局限性 306
4.电镜技术中的两大要点 307
5.电镜技术与病毒症状学的相关性 308
6.取材是电镜技术中的第一关键 310
7.电镜制样技术的种类与功能 311
二、超薄切片技术及应注意的问题 313
1.戊二醛固定剂的特性与使用时的要点 313
2.四氧化锇固定剂的特性与使用时的要点 314
3.混合固定剂和补充固定剂的使用要点 315
4.样品固定中缓冲液的选择及渗透压的调节 316
5.固定过程中的洗涤（冲洗）问题 316
6.样品脱水与置换的关键问题 317
7.样品树脂包埋技术中应注意的问题 318
8.切片过程中的若干问题应如何排解 320
9.超薄切片的染色 323
三、电镜的负染技术 325
1.负染技术的形成及应用上的意义 325
2.快速浸沾技术的关键问题 326
3.病毒提纯液的负染技术与提纯技术相关性的探讨 328
四、免疫电镜技术（改进法） 331
1.铺展A蛋白酶膜 331
2.滴加抗血清 331
3.滴加病毒抗原（病毒提纯液） 331
4.滴加抗血清修复 331
5.双氧铀或磷钨酸负染色 331
6.免疫电镜图像分析 331
五、电镜放射自显影 332
1.电镜放射自显影在植物病毒学研究中的作用与意义 332
2.电镜放射自显影的详细方法 332
六、几种特殊材料的电镜制样技术要点 335
1.禾本科植物及多年生果木的制样技术要点 335
2.真菌材料的样品制备要点 336
3.昆虫材料的样品制备关键要点 338
索引 341
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此时完成这部专著，笔者已是古稀过半之人了。唯一的动力还是来自在中国科学院微生物研究所，35年的科研实践所积累的千余幅电镜图片资料，与在电镜制样技术中具有独创性的实践经验总结，如果让它随时光的流逝而灭迹，那将是人生最大的遗憾。因为知识技能的积累，是属于社会的，而不是私产，所以应该让更多的人分享、借鉴，并有更大的发展，这一心愿也正是本书问世的原动力。
谈到积累二字，又使我不能不提起在我人生事业成长的道路上，不能忘记的三个人，他们是微生物所电镜室的奠基者徐浩先生，病毒研究室前主任莽克强研究员和现主任方荣祥院士。正是他们的认可与支持，使我成为当时我所唯一的例外，作为研究室人员可进入电镜技术室直接操作使用LKB超薄切片机、电子显微镜和同位素实验设备。正是这一特殊的身份，才使我得以把本应分隔的两个不同的工作体系自然贯通于一人身上，使病毒学研究的各项技术与电镜技术融会贯通成一个整体，使从病毒学症状调研开始，直至样品采集、生物学检测、病毒提纯鉴定、电镜样品制备、超薄切片、放射自显影、电镜观察、图片分析等众多的环节，始终由一人完成。所以在数十年的科研实践中能有大量的经验积累，不能否认是受益于这个特殊的身份所给予我的这个独具优势的实验环境。
除客观的优越条件外，有无笔者内因的条件呢？回答很简单，就是“珍爱”与“细节”四个字，珍惜难得的机遇，热爱自己的工作，在实验过程中注意细节的变化，一个成功的科技工作者（包括其他行业工作者）必须是一个注重细节的人，这一理念也是本书将要阐述的重点。
在写作过程中也曾有过犹豫、彷徨。曾有好心的同事善意地提醒，在21世纪的今天，生物学领域已进入分子水平和基因工程时代，此时撰写与电镜技术相关的细胞病理变化的专著是否有过时之感。这一席话使我沉静了一段时间，但深思之后，还是坚定了写下去的决心，原因是虽然人们已把21世纪定义为生物工程世纪，病毒学研究也已进入了分子水平，如核酸测序，基因的重组、表达、编码、调控等新技术的研究已成潮海之势，但客观地说这只是科学发展的不同阶段，在科研领域中不应该存在贵贱高低之分，前沿学科与基础学科是相辅相成的，越是在分子水平的高端时代，就越不能忽视细胞水平的研究发展。因为从理论上讲，所有生命现象的解释最后都要回到细胞内才能得到终极的解答。同样，所有的生物大分子所表现的各种属性，也只有在细胞体系里才能真正反映出生命的意义，所以不能忽视作为生物体最基本的结构单位即细胞的具体反应。从生命科学的角度看，细胞作为一个独立的整体而存在，分子对于细胞来说总是从属关系，二者是相辅相成又是不可分的，而电镜技术在其中承担着不可取代的作用，所以笔者相信随着生命科学研究的不断深入，本书内容也将会逐渐显现出可供借鉴参考的价值。这也可算是完成此书的第二动力吧。
在本书出版之际特向多位朋友的支持与帮助表示由衷的感谢。
感谢方荣祥院士对本书的内容进行了精心的修正，并作序。
感谢莽克强教授对本书的内容提出很多宝贵意见，并作序。
感谢马筠副教授给予的合作与支持。
感谢赵胜桃、王忠勤两位年轻朋友为本书的图文录入和整理做了大量工作。
感谢韩雪峰挚友为本书的出版提供的全力支持与帮助。
感谢中国佛教学会驻会副会长、北京广济寺方丈演觉法师为本书题写书名。
著者
2017年5月
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