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內容簡介: |
《分子生物学基本技能和策略》以分子生物学理论为指导,以基因工程技术流程为主导路线,系统介绍了基因克隆、基因表达、蛋白质分析等经典理论和实用技术,既包括简明扼要的纲领性技术原理,又覆蘯了生物化学与分子生物学领域常见和实用的技术方法和实验方案。
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目錄:
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目录篇 基因工程原理概论(3)0.1 分子生物学概述(3)0.2 基因工程概述(4)0.3 基因重组技术的应用前景(5)第1章 分离目的基因和基因载体(7)1.1 目的基因的获取(7)1.2 基因载体的选择(10)第2章 限制性内切核酸酶的应用(15)2.1 概念(15)2.2 序列特征(16)2.3 作用方式(17)2.4 同裂酶和同尾酶(18)2.5 影响酶切活性的主要因素(18)第3章 目的基因和基因载体的体外连接(19)3.1 DNA连接酶(19)3.2 连接方式(21)第4章 重组DNA转化宿主细胞(24)4.1 受体细胞的选择(24)4.2 重组基因的导人方法(25)4.3 转化细胞的扩增(27)第5章 重组体阳性克隆的筛选(28)5.1 遗传检测法(28)5.2 物理检测法(29)5.3 菌落杂交筛选法(30)5.4 免疫化学检测法(31)5.5 DNA-蛋白筛选法(32)5.6 PCR法确定重组体(32)5.7 DNA序列分析(3 2)5.8 真核宿主细胞的筛选标记(33)第6章 外源基因表达及表达产物的检测(34)6.1 宿主细胞(34)6.2 表达载体(34)6.3 表达产物和表达水平(35)6.4 表达产物的检测(38)6.5 表达蛋白质的分离纯化(39)第二篇 常用生化技术原理第1章 电泳技术(43)1.1 电泳基本原理(43)1.2 影响泳动度的主要因素(43)1.3 常用的电泳方法(44)第2章 层析技术(54)2.1 概述(54)2.2 层析原理(54)2.3 柱层析法(56)2.4 凝胶过滤层析法(58)2.5 气相色谱和高效液相色谱(61)第3章 分光光度技术(66)3.1 光学原理(66)3.2 Lambert-Beer定律(67)3.3 分光光度计的基本构造(68)3.4 紫外可见光分光光度计(69)3.5 荧光分光光度计(71)3.6 酶标仪(72)第4章 离心分析法(76)4.1 离心机基本原理(76)4.2 离心机的分类(77)4.3 离心机的结构(77)4.4 离心方法(81)第5章 透析(85)5.1 透析膜(袋)(85)5.2 溶剂(85)5.3 物理条件(86)第三篇 分子生物学常用技术第1章 目的基因和基因载体的分离(89)实验1 质粒DNA的提取(89)实验2 真核生物基因组DNA的提取(94)实验3 DNA的琼脂糖凝胶电泳(96)实验4 DNA的定量分析(101)实验5 PCR基因扩增(102)实验6 哺乳动物mRNA的纯化与鉴定(106)实验7 基因组DNA文库的建立(111)第2章 酶切与连接(117)实验1 限制性内切核酸酶的酶切与鉴定(117)实验2 载体与目的基因的连接(121)第3章 重组DNA的转化与筛选(125)实验1 重组质粒转化大肠杆菌及初步筛选(125)实验2 核酸探针的制备和标记(126)实验3 原位杂交法进行重组质粒的筛选(129)实验4 Northern杂交(131)实验5 真核细胞基因转染和筛选(133)实验6 转染细胞的筛选(135)第4章 外源基因在宿主细胞中的表达(138)实验1 在大肠杆菌(E.co/i)表达蛋白产物(138)实验2 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(142)实验3 蛋白质杂交法检测表达蛋白(145)附:常用生物化学实验技术实验1 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(149)实验2 凝胶过滤法测定蛋白质相对分子质量(157)实验3 透析实验(161)实验4 双缩脲反应(162)实验5 胰岛素及肾上腺素对血糖含量的影响(163)实验6 血糖含量测定(164)实验7 蛋白质定量测定(165)第四篇 分子生物学实验室基本操作和数据第1章 分子生物学实验室常规仪器设备(169)1.1 实验室的常规仪器及设施(169)1.2 离心机室的装备(173)1.3分析仪器室的设置(174)1.4 核素实验室(181)1.5 细胞培养室(184)1.6 暗室(187)1.7 冷室(187)第2章 实验室基本操作(188)2.1 玻璃仪器的洗涤(188)2.2 搅拌和振荡(188)2.3 容量玻璃仪器的使用方法(189)2.4 分光光度计的使用(190)2.5 干燥箱和恒温箱(192)2.6 电热恒温水浴(193)2.7 酸度计(193)第3章 实验室常用数据(196)第4章 常用载体图谱(204)主要参考文献(230)
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